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使用马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml配制培养基，马铃薯去皮后切块洗净，加水1000毫升，文火煮沸30分钟后过滤取汁，将琼脂放入液体内文火煮沸，持续搅拌至溶解，培养基煮好后趁热分装试管，塞上棉塞，包扎塑料薄膜，放入灭菌锅，之后拿出斜放，冷却后即凝固成斜面培养基。

第二，装载和灭菌。混合培养料后，炖半小时，而后充电。常规塑料袋能装0.25？0.3公斤。装袋时用手按压，料面要平整。而后，用锥形木棍从材料表面的中心刺穿一个直径为2.5厘米的通气孔。袋口塞有棉塞，外面包了一层牛皮纸。装瓶的话，可用量是500？1000毫升口径3.3？4.6厘米罐子或蘑菇瓶的灌装方法与装袋方法基本相同。

一、准备用品与试剂

主要包括各类营养物质、高压灭菌锅、天平、棉塞、试管（20毫米×200毫米）、稀碱液（1摩尔／升ＮａＯＨ溶液，即4克氢氧化钠溶于100毫升水）、稀酸液（1摩尔／升溶液，即84毫升浓加水916毫升）等。

灵芝母种制作技术

二、培养基配方

1、马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。

2、马铃薯100g、麸皮100克、蔗糖20g、KH2PO41g，MgSO40.5g、琼脂20g、水1000ml。

3、马铃薯200g、蔗糖20g、KH2PO42g，MgSO40.5g、维生素B120毫克、琼脂20g、水1000ml。

（三）栽培料的制作在配制培养料时先将木屑、麦麸、石膏粉等拌匀，含水60％--65％。料拌好后即可装袋。袋的规格有15cmx35cm或17cmx35cm的聚丙烯或聚乙烯袋。每袋装干料350--450克。聚乙烯袋采用常压14小时，聚丙烯袋采用高压2小时，将消毒好的料袋移入无菌箱或无菌室用气雾剂熏蒸消毒，同时打开紫外灯，保持40分钟，而后无菌操作。

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三、培养基配制

1、马铃薯等块茎、植物根去皮后切块洗净，加水1000毫升，文火煮沸30分钟后过滤取汁，其他各类成分称量要精准，配制过程中葡萄糖要zui后加入，灵芝一般要求PH5.5-6，用稀碱1摩尔/升Na〇H、稀酸1摩尔/升HC1来调整酸碱度至适度为止。将琼脂（若为条形需剪短）放入所配液体内，文火煮沸，煮时持续搅拌至溶解。

2、培养基煮好后趁热分装试管，装量为试管长度的四方之一左右，而后塞上棉塞。倾倒时要预防培养基沾污管口，万一沾上应用纱布擦净。试管要事先洗净，严防油渍。棉塞用未脱脂普通棉花，大小、松紧适中，要求与管壁紧贴。

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四、灭菌与培养

棉塞端包扎塑料薄膜，放入灭菌锅，经高压灭菌后，消除包扎的薄膜，直立于容器或框架内，使管内水蒸气向外界散发，当温度下降至50℃左右时（取试管1支贴放脸上，很烫但能放得住，大概在50℃左右），即可整捆斜放在斜面板上，斜面长度不能超过管长的二分之一，冷却后即凝固成斜面培养基。

溶化后加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维B1片，并将水补充至1000毫升。即成溶液体培养基。而后将液体培养基趁热分装入试管，装量为试管长度的四分之一。用棉赛堵住试管口，上面用双层牛皮纸包扎后，放入高压锅灭菌。灭菌时，先在夹层内放入适量水，再将分装好培养基的试管放入锅内，盖紧密闭加热：先将冷空气排出，而后关闭排气阀，加热升压。

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